2009年4月29日 星期三

魚類生命條碼使用的Primer

魚類生命條碼主要使用的Primers來自於下面這一篇文獻:DNA barcoding Australia’s fish species (2005)PDF】,長度皆為26,序列分別是:
FishF1-5' TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC
FishF2-5' TCGACTAATCATAAAGATATCGGCAC
FishR1-5' TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA
FishR2-5' ACTTCAGGGTGACCGAAGAATCAGAA


而F primer序列在COI大約在25-50的位置。
MOUSE TCAACCAATCACAAAGATATCGGAACCCTATATCTA 60

F1
... TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC---------- 26
F2
... TCGACTAATCATAAAGATATCGGCAC---------- 26
......** ** ** ** ***** ** ** **

R primer則是在COI大約706/709的位置。
MOUSE TGATTCTTTGGGCACCCAGAAGTTTATATTCTTAT 740
R1
... TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA--------- 26

R2... ---ACTTCAGGGTGACCGAAGAATCAGAA------ 26
............*..***...**..*...*.*


而有些樣本可能保存狀況不佳,或是PCR無法成功,因此近來有人提倡使用更小片段的DNA序列(約130 bp)作為DNA Barcode,稱之為mini-barcode,主要的文獻為A universal DNA mini-barcode for biodiversity analysis (2008)【PDF】。

Uni-MinibarF1: 5'-TCCACTAATCACAARGATATTGGTAC-3'
Uni-MinibarR1: 5'-GAAAATCATAATGAAGGCATGAGC-3'

F primer序列在COI大約在25-50的位置。
F1.... TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC---------- 26
MINIF1 TCCACTAATCACAARGATATTGGTAC---------- 26
MOUSE. TCAACCAATCACAAAGATATCGGAACCCTATATCTA 60
.......** ** ** ***** ** ** ** **

R primer則是在COI大約340的位置。
MINIR1 GAAAATCA-TAATGAAGGCATGAGC----- 24
MOUSE. CATCATCAATAGTAGAAGCAGGAGCAGGAA 370
........* ****..** *..* *** ****

PS:mini-barcode的primer雖然PCR產物是大約250 bp,不過有些樣本連這樣的長度可能都很難做出來,而長度太長很難作,長度太短資訊又不夠用來鑑定物種,所以在衡量過後,mini-barcode主要是以大約130 bp的長度當作DNA barcode,詳情就請看文章吧。

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